檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露

點擊次數(shù)：666 發(fā)布時間：2020/11/9 14:23:05

· 上傳者：上海極威生物科技有限公司

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· 所屬分類：應用方法

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· 資料簡介：

11月9日消息，據極威生物報道，檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露介紹稱，本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人 Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的含量。 l

有效期：6個月 l

保存條件：2-8℃ l

本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露，實驗原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成 *終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露，樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000 ×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。注：標本溶血會影響*后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

ELISA試劑盒用戶：ELISA樣本保存有哪些影響？

極威生物解答：樣本的保存：在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、會造成假陽性；為避免上述問題，在ELISA試劑盒測定血清標本時能新鮮采集；如果不能立即測定，根據相應的時間保存相應的溫度，5 d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應-20℃低溫凍存；如凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。

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