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· 資料簡(jiǎn)介： 乳酸脫氫酶（LDH）釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版） 主要用途 乳酸脫氫酶（LDH）釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)酶聯(lián)連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)檢測(cè)由于細(xì)胞損傷導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的乳酸脫氫酶釋放到細(xì)胞外，使四唑鹽染料碘硝基氯化四氮唑（INT）還原為紅色甲臜（farmazan），即比色法定量測(cè)定酶活性，以評(píng)價(jià)活體細(xì)胞繁殖的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種藥物、化學(xué)、環(huán)境因子和營(yíng)養(yǎng)因子處理的貼壁或懸浮生長(zhǎng)中的動(dòng)物或人體細(xì)胞。替代傳統(tǒng)的同位素[51 Cr]釋放檢測(cè)的*佳選擇。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，簡(jiǎn)捷敏感，性能穩(wěn)定，顯色清晰，檢測(cè)準(zhǔn)確，重復(fù)性好。 技術(shù)背景 細(xì)胞凋亡或壞死而造成的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的損害或完全裂解導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放外泄到培養(yǎng)液里，其中包括活性穩(wěn)定的乳酸脫氫酶。乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）釋放法的測(cè)定是基于在乳酸脫氫酶的作用下，還原NAD+反應(yīng)生成的NADH，再與氧化型2-（4-碘苯）-3-（4-硝基苯）-5-苯四唑（Iodonitrotetrazolium；INT）在硫辛酰胺脫氫酶（diaphorase）的催化下反應(yīng)生成紅色生色產(chǎn)物甲臜（formazan），在490nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰，從而確定釋放的乳酸脫氫酶的活性，作為細(xì)胞膜完整性的標(biāo)志：吸光值與細(xì)胞死亡或毒性程度成線性正相關(guān)。酶聯(lián)連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)為： lactate dehydrogenase NAD+ + Lactate → Pyruvate + NADH diaphorase NADH + INT → NAD+ + Formazan（red） 產(chǎn)品內(nèi)容 裂解液（Reagent A） 1毫升 補(bǔ)充液（Reagent B）1毫升 反應(yīng)液（Reagent C） 5毫升 顯色液（Reagent D） 1毫升 終止液（Reagent E） 1毫升 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F） 20微升 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份 保存方式 保存在－20℃冰箱里，反應(yīng)液（Reagent C）和顯色液（Reagent D）避免光照；有效保證6月 用戶自備 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板：用于細(xì)胞操作的容器 細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng) 孔板離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞 酶標(biāo)儀：用于定量檢測(cè)染色后的細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)步驟 一、 貼壁細(xì)胞檢測(cè) 1． 準(zhǔn)備96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)細(xì)胞（每孔100微升）：包括未處理的對(duì)照細(xì)胞（樣品對(duì)照孔），未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞（樣品酶活性對(duì)照孔），以及藥物處理的細(xì)胞（處理樣品孔），并做好標(biāo)記（細(xì)胞密度為每孔2 X 103至2 X 104細(xì)胞） 2． 到規(guī)定的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)前1小時(shí)，從濕潤(rùn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（注意：確保細(xì)胞培養(yǎng)液維持在100微升容量） 3． 加入10微升裂解液（Reagent A）到未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞孔里（樣品酶活性對(duì)照孔） 4． 同時(shí)加入10微升補(bǔ)充液（Reagent B）到其余所有檢測(cè)孔里 5． 放回濕潤(rùn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱里，繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)，即規(guī)定檢測(cè)時(shí)間 6． 從濕潤(rùn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 7． 放進(jìn)孔板離心機(jī)離心10分鐘，速度為250g 8． 分別小心移取50微升上清液到新的96孔板的相應(yīng)孔里，避免觸摸細(xì)胞顆粒，同時(shí)注意做好標(biāo)記 9． 分別加入50微升反應(yīng)液（Reagent C）（注意：使用前，須混勻） 10． 分別加入10微升顯色液（Reagent D） 11． 搖動(dòng)96孔板混勻 12． 在室溫下孵育30分鐘，避免光照 13． （選擇步驟）分別加入10微升終止液（Reagent E） 14． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測(cè)讀：波長(zhǎng)490nm 15． 計(jì)算處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù)：處理樣品孔吸光讀數(shù)－樣品對(duì)照孔吸光讀數(shù) 16． 計(jì)算樣品細(xì)胞酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù)：樣品酶活性對(duì)照孔吸光讀數(shù)－樣品對(duì)照孔吸光讀數(shù) 17． 計(jì)算細(xì)胞毒性或死亡率（％）： （處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù)÷樣品細(xì)胞酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù)）X 100 18． 或繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（A）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)或時(shí)間點(diǎn)或藥物濃度；據(jù)此計(jì)算其LD50 二、 懸浮細(xì)胞檢測(cè) 1． 準(zhǔn)備96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)懸浮細(xì)胞（每孔100微升）：包括未處理的對(duì)照細(xì)胞（樣品對(duì)照孔），未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞（樣品酶活性對(duì)照孔），以及藥物處理的細(xì)胞（處理樣品孔），并做好標(biāo)記（細(xì)胞密度為每孔5 X 103至5 X 104細(xì)胞） 2． 到規(guī)定的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)前1小時(shí)，從濕潤(rùn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（注意：確保細(xì)胞培養(yǎng)液維持在100微升容量） 3． 加入10微升裂解液（Reagent A）到未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞孔里（樣品酶活性對(duì)照孔） 4． 同時(shí)加入10微升補(bǔ)充液（Reagent B）到其余所有檢測(cè)孔里 5． 放回濕潤(rùn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱里，繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)，即規(guī)定檢測(cè)時(shí)間 6． 從濕潤(rùn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 7． 放進(jìn)孔板離心機(jī)離心10分鐘，速度為250g 8． 分別小心移取50微升上清液到新的96孔板的相應(yīng)孔里，避免觸摸細(xì)胞顆粒，同時(shí)注意做好標(biāo)記 9． 分別加入50微升反應(yīng)液（Reagent C）（注意：使用前，須混勻） 10． 分別加入10微升顯色液（Reagent D） 11． 搖動(dòng)96孔板混勻 12． 在30℃溫度下孵育30分鐘，避免光照 13． （選擇步驟）分別加入10微升終止液（Reagent E） 14． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測(cè)讀：波長(zhǎng)490nm 15． 計(jì)算處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù)：處理樣品孔吸光讀數(shù)－樣品對(duì)照孔吸光讀數(shù) 16． 計(jì)算樣品細(xì)胞酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù)：樣品酶活性對(duì)照孔吸光讀數(shù)－樣品對(duì)照孔吸光讀數(shù)） 17． 計(jì)算細(xì)胞毒性或死亡率（％）： （處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù)÷樣品細(xì)胞酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù)）X 100 18． 或繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（A）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)或時(shí)間點(diǎn)或藥物濃度；據(jù)此計(jì)算其LD50 注意事項(xiàng) 1． 本產(chǎn)品為100次（1個(gè)96孔板）操作 2． 操作時(shí)須戴手套 3． 整個(gè)操作須無(wú)菌操作 4． 建議每個(gè)樣品安排3個(gè)孔，即重復(fù)3次，計(jì)算時(shí)取其平均值 5． 檢測(cè)體系相應(yīng)增加，試劑用量按比例相應(yīng)增加：例如200微升檢測(cè)體系，試劑用量增加1倍 6． 每孔中的培養(yǎng)液需100微升，避免使用周邊培養(yǎng)孔（常常液體蒸發(fā)而減少） 7． 系統(tǒng)測(cè)試，可以加入2至5微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到50微升無(wú)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液里，然后按照說(shuō)明書(shū)加入反應(yīng)液（Reagent C）和顯色液（Reagent D）即可 8． 細(xì)胞裂解效果不佳，可以使用20微升裂解液（Reagent A）處理 9． 孵育時(shí)，須避光 10． 染色完成后，建議即刻檢測(cè)，*遲不得超過(guò)1小時(shí) 11． 細(xì)胞培養(yǎng)和處理時(shí)，避免使用草酸（OXALATE），草氨酸（OXAMATE）和EDTA，否則影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性 12． 血清含有乳酸脫氫酶，建議使用濃度不要超過(guò)1％ 13． 細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)、密度過(guò)高、離心速度過(guò)大、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過(guò)大等因素會(huì)造成細(xì)胞自然釋放乳酸脫氫酶 14． 酚紅會(huì)干擾檢測(cè) 15． 樣品酶活性對(duì)照孔或OD吸光讀數(shù)與細(xì)胞裂解程度密切相關(guān) 16． 如果用戶沒(méi)有孔板離心機(jī)，則移取上清液時(shí)格外小心 17． 如果用戶沒(méi)有匹配的波長(zhǎng)，可以使用波長(zhǎng)470nm至570nm之間的任一波長(zhǎng)替代 18． 本公司提供系列細(xì)胞繁殖檢測(cè)試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感 使用承諾 杰美基因秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)立即以書(shū)面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。 友情提醒 IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 訂購(gòu)信息 單組分訂購(gòu)信息 編號(hào)名稱規(guī)格 GMS10073乳酸脫氫酶釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒100次 GMS10073A 裂解液（Reagent A）50毫升 GMS10073B 補(bǔ)充液（Reagent B）50毫升 GMS10073C 反應(yīng)液（Reagent C）50毫升 GMS10073D 顯色液（Reagent D）10毫升 GMS10073E 終止液（Reagent E）10毫升 GMS10073F 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）100微升 試劑盒訂購(gòu)信息 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 GMS10007 結(jié)晶紫細(xì)胞群落染色試劑盒 250次 GMS10008 細(xì)胞活力藍(lán)色熒光檢測(cè)試劑盒 50次 GMS10009 細(xì)胞活力臺(tái)盼藍(lán)染色試劑盒 100次 GMS10029 中性紅細(xì)胞繁殖比色法定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10039 MTT比色法細(xì)胞繁殖測(cè)定試劑盒 500次 GMS10043 MTS細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10044 綠色熒光細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10045 PICOGREEN細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑盒 50次 GMS10046 G-B細(xì)胞活力和凋亡檢測(cè)試劑盒 50次 GMS10051 ATP生物發(fā)光法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 50次 GMS10052 R-G細(xì)胞活力和凋亡檢測(cè)試劑盒 100次 GMS10033 BrdU標(biāo)記法細(xì)胞繁殖流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 10次 GMS10034 BrdU標(biāo)記法細(xì)胞繁殖顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10次 GMS10073 乳酸脫氫酶（LDH）釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 100次 GMS10083 酸性磷酸酶（AP）活力法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 100次 GMS10084 葡萄糖耗損法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10085 紅色熒光細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10086 磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B）細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10087 考馬斯亮藍(lán)細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 500次 GMS10036 XTT比色法細(xì)胞繁殖測(cè)定試劑盒 500次
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