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點(diǎn)擊次數(shù)：16657 發(fā)布時(shí)間：2024/2/5 9:47:46
主要用途
冰凍切片組織TUNEL熒光測(cè)定試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)方法，包括固著、封阻、通透等完整步驟，從存檔中的冰凍組織切片中探尋DNA斷點(diǎn)，即運(yùn)用修飾過的核苷酸，在末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）的幫助下，對(duì)DNA單鏈或雙鏈上斷點(diǎn)處的3’末端進(jìn)行熒光素標(biāo)記，原位探測(cè)和定量分析單細(xì)胞水平的DNA降解狀況的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍組織切片的DNA降解測(cè)定。廣泛用于細(xì)胞凋亡的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，反應(yīng)敏感，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
細(xì)胞凋亡，或細(xì)胞程序性死亡，在諸如形態(tài)發(fā)育、免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、以及腫瘤和神經(jīng)退行性疾病等各種生物學(xué)過程中，起著實(shí)質(zhì)性的作用。凋亡細(xì)胞具有形態(tài)、生化、和分子方面的顯著特征。其中內(nèi)源性核酸酶的激活，將DNA鏈在核小體間連接區(qū)切成缺口，使核內(nèi)DNA斷裂成小片斷。在組織細(xì)胞原位DNA切口處可被末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）標(biāo)記上生物素dUTP，即TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling），然后通過與熒光素綴合卵白素（FITC conjugated avidin）的反應(yīng)，顯示綠色熒光（激發(fā)波長(zhǎng)488nm， 散發(fā)波長(zhǎng)530nm）。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 毫升
固著液（Reagent B） 毫升
封阻液（Reagent C） 微升
酶標(biāo)液（Reagent D） 微升
熒光液（Reagent E） 微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存封阻液（Reagent C）、酶標(biāo)液（Reagent D）和熒光液（Reagent E）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免反復(fù)凍融，其余的保存在4℃冰箱里；熒光液（Reagent E），避免光照；有效bao證6月
用戶自備
小型染色缸：用于切片的清洗操作
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析
特別注意
1． 酶標(biāo)液（Reagent D）不能在室溫下凍融，而必須在冰槽里凍融，凍融后即刻使用；嚴(yán)禁反復(fù)凍融；考慮分裝，以備下次使用
2． 熒光液（Reagent E）避免光照
3． 每次移取試劑，須更換槍頭，以免污染母液，影響結(jié)果
實(shí)驗(yàn)步驟
一、樣品預(yù)處理
1． 取出10片待測(cè)的冰凍組織切片
2． 室溫下，小心加上xx微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿樣品表面
3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
4． 小心加上xx微升固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
5． 室溫下孵育30分鐘
6． 小心移去切片上的固著液（Reagent B）
7． 室溫下，將切片置入xx毫升清理液（Reagent A）中，孵育2分鐘
8． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
9． 小心加上xx微升封阻液（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面
10． 室溫下孵育30分鐘
11． 室溫下，將切片置入xx毫升清理液（Reagent A）中，孵育5分鐘
12． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
二、斷點(diǎn)標(biāo)記處理
1． 小心加上xx微升酶標(biāo)液（Reagent D），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
2． 在37℃濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱里，孵育1小時(shí)，保持濕潤(rùn)，避免干燥
3． 小心移去切片上的酶標(biāo)液（Reagent D）
4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
三、樣本染色處理
1． 小心加上xx微升熒光液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
2． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
3． 小心移去切片上的熒光液（Reagent E）
4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
5． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
6． 放上蓋玻片或封片
7． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發(fā)波長(zhǎng)488nm， 散發(fā)波長(zhǎng)530nm）觀察：陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為10次操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 封阻液（Reagent C）達(dá)到100％封閉效果，超過雙氧水封閉效果
4． 酶標(biāo)液（Reagent D）嚴(yán)禁反復(fù)凍融
5． 清理液（Reagent A）50毫升置于小型染色缸里，可重復(fù)使用
6． 所有操作在室溫下進(jìn)行，除操作中規(guī)定之外
7． 每次更換試劑溶液時(shí)，保持樣品表面基本晾干：可以使用餐巾綿紙吸干或槍頭抽掉
8． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
9． 染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察
10． 本公司提供系列細(xì)胞凋亡試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
使用cheng諾
極威生物秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量cheng諾”的宗旨為我們的用戶提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，bao證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購(gòu)信息
單組分訂購(gòu)信息
編號(hào) 名稱 規(guī)格
G&VS10022.5 冰凍切片組織TUNEL熒光測(cè)定試劑盒 10/20次
G&VS10022.5A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10022.5B 固著液（Reagent B） 毫升
G&VS10022.5C 封阻液（Reagent C） 毫升
G&VS10022.5D 酶標(biāo)液（Reagent D） 毫升
G&VS10022.5E 熒光液（Reagent E） 毫升
試劑盒訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品編號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| G&VS10022.1 | 細(xì)胞TUNEL顯色法（DAB）測(cè)定試劑盒 | 10/20次 |
| G&VS10022.2 | 冰凍切片TUNEL顯色法（DAB）測(cè)定試劑盒 | 10次 |
| G&VS10022.3 | 石蠟切片TUNEL顯色法（DAB）測(cè)定試劑盒 | 10次 |
| G&VS10022.4 | 細(xì)胞TUNEL熒光法（Fluorescein）測(cè)定試劑盒 | 10次 |
| G&VS10022.5 | 冰凍切片TUNEL熒光法（Fluorescein）測(cè)定試劑盒 | 10次 |
| G&VS10022.6 | 石蠟切片TUNEL熒光法（Fluorescein）測(cè)定試劑盒 | 10次 |
| G&VS10022.7 | 細(xì)胞TUNEL比色法定量檢測(cè)試劑盒 | 10/50次 |
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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