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技術(shù)文章

細(xì)菌氧化應(yīng)激活性氧高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

點(diǎn)擊次數(shù):16660   發(fā)布時(shí)間:2023/10/31 21:23:06

 主要用途

 

細(xì)菌氧化應(yīng)激活性氧高質(zhì)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯,在細(xì)氧化條件下,產(chǎn)生熒光,來(lái)定量檢測(cè)細(xì)活性氧族的生成和增加的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種實(shí)驗(yàn)用細(xì)菌菌株氧化應(yīng)激活性氧的分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)易,活體檢測(cè),性能穩(wěn)定,滯留持久,熒光清晰。

 

 

技術(shù)背景

 

細(xì)菌作為模式生物,是環(huán)境化學(xué)毒性研究的常用工具。活性氧的檢測(cè)可以用于諸如多環(huán)芳烴化合物或重金屬的毒性作用以及修復(fù)(remediation)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。超氧自由基陰離子superoxide radicalO2-)、過(guò)氧化氫(hydrogen peroxideH2O2)、羥自由基或氫氧基hydroxyl radical;OH-)、過(guò)氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氫過(guò)氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-、過(guò)氧亞硝基陰離子(peroxynitrite anionONOO-次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基semiqui radical)、單線態(tài)氧氣(singlet oxygen)等細(xì)胞內(nèi)活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯(6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl esterCMH2DCFDA)是取代二氯二氫熒光素二乙酯(2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetateDCFH-DA)的升級(jí)產(chǎn)品,一種wan自由通過(guò)細(xì)胞膜,并在細(xì)胞內(nèi)chang滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過(guò)氧化氫、羥自由基或氫氧基、過(guò)氧化基、次氯酸等氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測(cè)定細(xì)活性氧族的濃度。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液(Reagent A   毫升

染色液(Reagent B   微升

稀釋液(Reagent C   毫升

溶解液(Reagent D   毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書   1

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent B在-20冰箱里,嚴(yán)格避免光照;其余的保存在4冰箱里,有效6個(gè)

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于染色的容器

微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作

培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于染色孵育

200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板:用于熒光定量分析

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于熒光定量分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 直接測(cè)定

 

1. 準(zhǔn)備好1毫升新鮮的待測(cè)菌液(OD6000.5;1 X 108細(xì)胞/毫升)

2. 200微升1.5毫升離心管

3. 加入xx染色液(Reagent B,混勻

4. 轉(zhuǎn)移到200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板

5. 放進(jìn)37熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)490nm,散發(fā)波長(zhǎng)530nm):每隔5分鐘測(cè)讀一次,持續(xù)120分鐘――RFU增高,表明活性氧族(ROS)含量

6. 構(gòu)建活性氧和時(shí)間關(guān)系曲線

 

二、 培養(yǎng)上清測(cè)定

 

1. 準(zhǔn)備好1毫升新鮮的待測(cè)菌液(OD6000.5;1 X 108細(xì)胞/毫升)

2. 移入1.5毫升離心管

3. 放進(jìn)4微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1000g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

4. 小心移取200微升上清液到1.5毫升離心管

5. 加入xx染色液(Reagent B,混勻

6. 放進(jìn)37培養(yǎng)箱里或恒溫水槽孵育3060分鐘,避免光照

7. 轉(zhuǎn)移到200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板

8. 放進(jìn)37熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)490nm,散發(fā)波長(zhǎng)530nm):――RFU增高,表明活性氧族(ROS)含量

 

三、細(xì)菌內(nèi)測(cè)定

 

實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B置入冰槽里融化。然后移出xx微升染色液(Reagent B到新的1.5毫升離心管,加入xx微升稀釋液(Reagent C,混勻后,標(biāo)記為染色工作液,置入冰槽里。然后進(jìn)行下列操作。

 

1. 準(zhǔn)備好1毫升新鮮的待測(cè)菌液(OD6000.5;1 X 108細(xì)胞/毫升)

2. 移入到1.5毫升離心管

3. 放進(jìn)4微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1000g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

4. 小心抽掉上清液

5. 加入xx毫升預(yù)冷的清理液(Reagent A,混勻

6. 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1000g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

7. 小心抽掉上清液

8. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟57一次

9. 加入xx升含有染色液(Reagent B稀釋液(Reagent C染色工作液,混勻

10. 放進(jìn)37培養(yǎng)箱里或恒溫水槽孵育30分鐘,避免光照

11. 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1000g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

12. 小心抽掉上清液

13. 加入xx毫升預(yù)冷的清理液(Reagent A,混勻

14. 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1000g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

15. 小心抽掉上清液

16. 加入xx微升預(yù)冷的清理液(Reagent A,混勻

17. 加入xx微升溶解液(Reagent D

18. 上下傾倒混勻數(shù)次

19. 轉(zhuǎn)移到200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板

20. 放進(jìn)37熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)490nm,散發(fā)波長(zhǎng)530nm):――RFU增高,表明活性氧族(ROS)含量

21. 或每隔5分鐘測(cè)讀一次,持續(xù)30分鐘――RFU增高,表明活性氧族(ROS)含量

22. 構(gòu)建活性氧和時(shí)間關(guān)系曲線

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為50次操作

2. 操作時(shí),須戴手套

3. 操作時(shí),避免污染母液

4. 建議染色完成后,即刻進(jìn)行熒光檢測(cè)分析

5. 孵育時(shí),必須避免光照

6. 本產(chǎn)品染色劑不易洗掉,染色持久

7. 本公司提供陽(yáng)性對(duì)照甲萘醌溶液(G&VS12041),觀察細(xì)胞熒光增強(qiáng)現(xiàn)象

8. 本公司同時(shí)提供細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)活性氧初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒(G&VS10016.14),滿足不同用戶需求

9. 本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

 

使用cheng

 

極威生物秉著信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量cheng的宗旨為我們的用戶提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,bao說(shuō)明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

訂購(gòu)信息

 

單組分訂購(gòu)信息

 

編號(hào)名稱規(guī)格

G&VS10016.13細(xì)菌氧化應(yīng)激活性氧高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒50

G&VS10016.13A清理液(Reagent A毫升

G&VS10016.13B染色液(Reagent B毫升

G&VS10016.13C 稀釋液(Reagent C毫升

G&VS10016.13D 溶解液(Reagent D毫升

G&VS12041 甲萘醌溶液1毫摩爾)毫升

 

試劑盒訂購(gòu)信息

 

產(chǎn)品編號(hào)

名稱

規(guī)格

G&VS10016.1

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒

20

G&VS10016.2

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒

100

G&VS10016.3

活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒

8/20

G&VS10016.4

活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒

40/100

G&VS10016.5

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒

50

G&VS10016.6

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒

50

G&VS10016.7

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒

20

G&VS10016.8

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒

50

G&VS10016.9

植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒

20

G&VS10016.10

植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒

50

G&VS10016.11

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒

50

G&VS10016.12

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒

50

G&VS10016.13

細(xì)菌氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒

20

G&VS10016.14

細(xì)菌氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒

50

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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