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維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞簡(jiǎn)介
維生素B6試劑盒簡(jiǎn)單易用，采用微生物方法，在微孔板種定量檢測(cè)食品、藥品和飼料中的維生素B6總量（包括添加和原生維生素B6）。所有所需的試劑均包含在試劑盒中。本試劑盒共能提供96次檢測(cè)（包括標(biāo)準(zhǔn)品）。使用ELISA reader (610 - 630 nm 或者540 - 550 nm)進(jìn)行讀數(shù)。
樣品處理：
液體樣品：無(wú)菌過(guò)濾、稀釋
固體樣品：均質(zhì)樣品、提�。x心）、無(wú)菌過(guò)濾和稀釋
含原生維生素B6的樣品處理：
固體樣品：均質(zhì)樣品、酸處理、提�。x心）、無(wú)菌過(guò)濾和稀釋
所需時(shí)間：試驗(yàn)過(guò)程…….. …………………………………約60分鐘
評(píng)價(jià)時(shí)間…………………………………………….2分鐘
孵育：30 °C黑暗條件下44 – 48小時(shí)
標(biāo)準(zhǔn)品范圍：0.04－0.24 mg / 100g（ml）
回收率： 90－105％
Intra-assay CV for standards: < 10 %
Inter-assay CV for standards: < 10 %
1.產(chǎn)品用途
維生素B6微孔板檢測(cè)試劑盒是利用微生物方法，用于定量檢測(cè)食品、藥品和飼料中的維生素B6總量（包括添加和原生維生素B6）。本微生物檢測(cè)系統(tǒng)符合標(biāo)準(zhǔn)。
2. 檢測(cè)原理
維生素B6是從樣品稀釋提取所獲得的。將稀釋了的提取物和維生素B6檢測(cè)培養(yǎng)基加入包被有釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ATCC Nr. 9080)的微孔中。則釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的生長(zhǎng)狀況取決于維生素B6的含量。添加維生素B6作為標(biāo)準(zhǔn)或者作為樣品混合物，細(xì)菌會(huì)一直生長(zhǎng)直至維生素B6被消耗殆盡。孵育條件應(yīng)為37 °C黑暗條件下孵育44-48小時(shí)。細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)新陳代謝的強(qiáng)度和維生素B6的含量形成關(guān)系并可以繪制稱標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)ELISA reader在610 - 630 nm (或者540 - 550 nm)讀取結(jié)果。
3.檢測(cè)說(shuō)明
水質(zhì)在整個(gè)測(cè)試過(guò)程中起著十分重要的作用。本試劑盒中帶有作為溶劑的無(wú)菌蒸餾水，用于重組、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的提取。附加的蒸餾水在以上過(guò)程中都是必不可少的。
要求整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中保持無(wú)菌操作。所使用的玻璃器皿保zheng無(wú)化學(xué)殘留物、清潔劑、化學(xué)物質(zhì)和微生物污染。因此，玻璃器皿使用先用3 mol / l的鹽酸漂洗，然后再用蒸餾水250 °C (482 °F)條件下加熱1小時(shí)。在使用回至室溫。
維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞樣品制備和提取
可以不用在無(wú)菌條件下進(jìn)行。樣品的過(guò)濾、稀釋與檢測(cè)的準(zhǔn)備工作則與整個(gè)檢測(cè)過(guò)程一樣必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
檢測(cè)的每一個(gè)步驟都需要校正。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)該進(jìn)行3次檢測(cè)（注意：標(biāo)準(zhǔn)中推薦3次檢測(cè)方法）。未知樣品應(yīng)該用2份提取物的稀釋液檢測(cè)（誤差應(yīng)該小于10%）。如果在進(jìn)一步稀釋時(shí)檢出的維生素B6含量提高，則可能含有抑制劑，比如重金屬或者抗生素。
4. 提供試劑
每個(gè)試劑盒中包含足夠進(jìn)行96次試驗(yàn)的材料和標(biāo)準(zhǔn)品
每個(gè)試劑盒中包含：
1 × 96孔微孔板，包被有釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ATCC Nr. 9080)
3 × 無(wú)菌蒸餾水 (30 ml) ，用于準(zhǔn)備培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品提取稀釋液
3 × 維生素B6培養(yǎng)基 (固體)
3 × 維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品 (固體)
3 × 粘性箔
1 × 微孔板固定器
5. 需要試劑但試劑盒種不提供
−黑暗條件下的培養(yǎng)箱，30 °C
−90 -100 °C (194 - 212 °F)水浴，或者高壓滅菌鍋
−ELISA reader 610 - 630 nm (540 - 550 nm)
−pH 測(cè)量?jī)x
−離心機(jī)，大約10000 × g
−刻度移液槍 20 - 200 µl; 100 - 1000 µl
−滅菌微量移液槍 tips 20 - 200 µl ａnd 100 - 1000 µl
−無(wú)菌試管 1.5 - 2.0 ml
−移液槍 5 or 10 ml
−帶帽的無(wú)菌離心機(jī)管 (15 ａnd 50 ml)
−帶無(wú)菌注射器的0.2 µm無(wú)菌濾膜
−雙蒸水用于樣品提取(available at ifp)
−0.1mol / l HCl
−2 mol / l NaOH (0.8 g 溶解于100 ml水中)
維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞檢測(cè)原生維生素B6所需試劑
- 1 mol / l 硫酸
- 氫氧化鈉溶液（100ml溶液中含40g）
6．用戶須知
−檢測(cè)培養(yǎng)基有可能刺激眼睛、皮膚和隔膜
−完成試驗(yàn)后須根據(jù)規(guī)章處理檢測(cè)儀器（如使用高壓滅菌鍋）
7．貯藏條件
試劑盒應(yīng)存放在2－8℃條件下
處理過(guò)的試劑（標(biāo)準(zhǔn)品、培養(yǎng)基）和維生素B6緩沖液應(yīng)馬上使用，并在檢測(cè)后丟棄。
將未使用的微孔板條放回原來(lái)的箔袋中，并與干燥劑一起重新封好，放在2－8℃溫度下。微孔板須防止受潮或受到其他污染。
請(qǐng)勿在試劑盒標(biāo)注的保質(zhì)期之后使用。
8．試劑失效的跡象
空白的吸光度值大于標(biāo)準(zhǔn)品1。
濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值小于0.6（630nm）。
9．樣品處理
樣品應(yīng)儲(chǔ)存在4℃、避光條件下。
檢測(cè)富集營(yíng)養(yǎng)樣品中的游離維生素B6時(shí)，熱水提取方法通常就足夠了。但是富集營(yíng)養(yǎng)的飲料可以在過(guò)濾之后直接使用。由于使用熱水提取，所以原生維生素B6只能被部分檢測(cè)。對(duì)于檢測(cè)原生維生素B6總量，樣品應(yīng)用酸水解處理。
樣品提取時(shí)需要1g或1ml樣品溶解于40ml雙蒸水或提取溶液中。相當(dāng)于樣品的稀釋倍數(shù)為40，這個(gè)稀釋倍數(shù)已經(jīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線中。
樣品提取后需要進(jìn)一步稀釋。稀釋倍數(shù)取決于由標(biāo)準(zhǔn)曲線中間部分顯示的標(biāo)準(zhǔn)濃度，它是除以其含量獲得（詳見(jiàn)產(chǎn)品標(biāo)簽或認(rèn)證，每100g或100ml濃度）。至于涉及到膠囊或藥片時(shí)，濃度時(shí)常表達(dá)為“/片膠囊”，此時(shí)濃度必須轉(zhuǎn)化成“/100g”（詳見(jiàn)11.的計(jì)算示例）。這個(gè)稀釋倍數(shù)在計(jì)算結(jié)果的時(shí)候必須考慮。
樣品提取時(shí)使用無(wú)菌濾膜（0.2μm）進(jìn)行過(guò)濾，此時(shí)。如果由于固體顆�；蛘邷啙釋�(dǎo)致過(guò)濾不順利，則在無(wú)菌過(guò)濾之應(yīng)先離心（至少在8000g的離心力下離心5分鐘）。
樣品提取液可以在提取當(dāng)天使用，使用之應(yīng)避光保存。提取稀釋液應(yīng)馬上使用。
9.1.液體樣品（富含維生素的果汁、健康飲品）
加入1ml樣品至50ml無(wú)菌離心管中，準(zhǔn)que加入雙蒸水至40ml，搖勻。使用無(wú)菌0.2μm濾膜過(guò)濾1.0～1.5ml樣品到一個(gè)無(wú)菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見(jiàn)計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù)）。
9.2.含維生素的可溶固體樣品（粉末、藥片）
稱取1g樣品至50ml無(wú)菌試管，加入30ml 0.1mol / l的鹽酸，振蕩至充分溶解，再用2mol / l 氫氧化鈉調(diào)整pH值至4.5～5.5。用雙蒸水準(zhǔn)que加至40ml刻度。用0.2μm無(wú)菌濾膜過(guò)濾1.0～1.5ml樣品至一無(wú)菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見(jiàn)計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù)）。
9.3.維生素膠囊、藥片
先膠囊或藥片的重量必須確定（平均5～10個(gè)膠囊或藥片）。藥片用研缽或攪拌機(jī)均質(zhì)，膠囊須切開(kāi)并取出其中的顆粒進(jìn)行試驗(yàn)。
稱取1g藥片或切開(kāi)1個(gè)膠囊至一個(gè)50ml無(wú)菌離心管中，用0.1mol / l的HCl加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取30分鐘。在提取時(shí)試管須振蕩至少5次。當(dāng)然期間必須bao證試管是否充分封閉。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調(diào)整pH值至4.5～5.5。加無(wú)菌水精que至40ml。使用0.2μm無(wú)菌濾膜過(guò)濾1.0～1.5ml樣品至一個(gè)無(wú)菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見(jiàn)計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù)）。
9.4 含維生素的谷物、嬰兒食品、面包、面粉、食品添加劑
均質(zhì)樣品，稱量1g樣品至一50ml離心管中，用0.1mol / l的HCl加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取30分鐘。在提取時(shí)試管須振蕩至少5次。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調(diào)整pH值至4.5～5.5。加無(wú)菌水精que至40ml。使用0.2μm無(wú)菌濾膜過(guò)濾1.0～1.5ml樣品至一個(gè)無(wú)菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見(jiàn)計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù)）。
9.5 原生維生素B6
提取復(fù)合物時(shí)，檢測(cè)含原生維生素B6的樣品必須先經(jīng)過(guò)用酸水化處理。稱量1g樣品至一50ml離心管中，用1.0mol / l的硫酸加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取6小時(shí)。在提取時(shí)試管須振蕩至少5次。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調(diào)整pH值至4.5～5.5。加無(wú)菌水精que至40ml。使用0.2μm無(wú)菌濾膜過(guò)濾1.0～1.5ml樣品至一個(gè)無(wú)菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見(jiàn)計(jì)算示例中的稀釋倍數(shù)）。
10 檢測(cè)過(guò)程
10.1 準(zhǔn)備
裝有無(wú)菌水的瓶子：推開(kāi)藍(lán)色帽，沿著玻璃邊緣垂直向上拉開(kāi)，丟棄。
維生素B6培養(yǎng)基：足夠進(jìn)行至少6條微孔板試驗(yàn)，培養(yǎng)基必須在試驗(yàn)之新鮮制備。打開(kāi)瓶蓋用鑷子從干燥劑中取出培養(yǎng)基，丟掉干燥劑。
－加入10ml無(wú)菌水（取自試劑盒中）至維生素B6培養(yǎng)基中
－蓋好培養(yǎng)基瓶，搖勻
－在90～100℃水浴中加熱至少5分鐘，期間振蕩至少5次；期間bao證瓶子封閉
－迅速冷卻至室溫（低于30℃）
－使用0.2μm無(wú)菌濾膜過(guò)濾培養(yǎng)基至15ml無(wú)菌離心管中
每個(gè)維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品都足夠進(jìn)行至少3個(gè)孔的試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)品必須在試驗(yàn)之新鮮制備。
－打開(kāi)維生素維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品瓶，取出蓋子。丟掉蓋子和紅色塞子
－加入x ml（x＝詳見(jiàn)質(zhì)量bao證書(shū)）無(wú)菌水（取自試劑盒）至標(biāo)準(zhǔn)品瓶中。用移液管溶解標(biāo)準(zhǔn)品：用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的水沖洗移液管尖數(shù)次＝標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液
－取6個(gè)無(wú)菌管（1.5～2.0ml）并按照下列表格準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線 mg/100g(ml) | 無(wú)菌水 μl |
| 標(biāo)準(zhǔn)濃縮液 μl |
| 總體積 μl |
| 空白：0 | 900 | ＋ | 0 | ＝ | 900 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品1：0.002 | 900 | ＋ | 100 | ＝ | 1000 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品2：0.004 | 400 | ＋ | 100 | ＝ | 500 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品3：0.006 | 350 | ＋ | 150 | ＝ | 500 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品4：0.008 | 300 | ＋ | 200 | ＝ | 500 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品5：0.012 | 200 | ＋ | 300 | ＝ | 500 |
10.2.檢測(cè)過(guò)程
－用移液管吸取150μl維生素B6培養(yǎng)基至微孔中
－用移液管吸取150μl標(biāo)準(zhǔn)品貨樣品至指定的微孔中（用標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液沖洗移液管尖）
－用粘合箔蓋住微孔條或微孔：除去粘合箔上的保護(hù)層，將其平放在微孔條上，用手或壓舌板將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條。
注意：bao證粘合箔和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分
－在30℃黑暗條件下（可用孵育器）孵育44～48小時(shí)
10.3.測(cè)量
－再次向下擠壓粘合箔，將微孔板向上放置在桌面上，在桌面平面上振蕩，使微生物溶解在培養(yǎng)基中
－對(duì)角揭去粘合箔，從左邊開(kāi)始進(jìn)行
－破壞微孔液體表面所有的泡沫（可以用移液管尖去除）
－用ELISA reader 610～630nm（或540～550nm）條件下讀取渾濁度
注意：
－當(dāng)孵育44～48小時(shí)后，微孔板能在冰箱里多儲(chǔ)存48小時(shí)，因此必須在這個(gè)時(shí)間段內(nèi)測(cè)量混濁度
－為了避免由于假期或zhou末所產(chǎn)生的時(shí)間上的損失，微孔板能在60小時(shí)之后進(jìn)行評(píng)估計(jì)算。推薦使用定時(shí)器在48小時(shí)之后關(guān)閉孵育器。
11.計(jì)算
推薦在計(jì)算結(jié)果時(shí)使用必發(fā)公司提供的配套軟件。
樣品稀釋倍數(shù)40已經(jīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線中。在下面的公式中，需要考慮提取的進(jìn)一步稀釋倍數(shù)和不同的樣品重量。
由于校準(zhǔn)過(guò)程中使用了維生素B6氫氯化合物，所以計(jì)算活性維生素B6還必須考慮0.822這個(gè)倍數(shù)。
液體樣品（富含維生素的果汁、健康飲品）
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822
維生素B6 ＝ ──────────────────────
（mg/100ml） 樣品總量（ml）
固體樣品（谷物、嬰兒食品、面粉、面包、添加物）
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822
維生素B6＝ ────────────────────────
（mg/100g） 樣品總量（g）
膠囊或藥片
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822
維生素B6 ＝ ──────────────────────
（mg/100g） 樣品總量（g）
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×藥片重量（g）×稀釋倍數(shù)×0.822
維生素B6＝ ──────────────────────────
（mg/藥片） 100×樣品總量（g）
樣品提取的稀釋倍數(shù)計(jì)算示例
提取液稀釋?xiě)?yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間區(qū)域。因此，濃度應(yīng)轉(zhuǎn)換為維生素B6鈣，并除以標(biāo)準(zhǔn)2
例a： 固體樣品，標(biāo)注濃度3mg / 100g
計(jì)算： 3mg×1.22 ÷ 0.004mg ＝915
→ 結(jié)果為稀釋倍數(shù)大約為1000
→ 1 ：1000 稀釋
1 ：1000
1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），
1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）。
例b： 藥片，標(biāo)注濃度3mg / 片
計(jì)算： 3mg×1.09 / 片，平均重量1g
＝ 300mg / 100g
300mg×1.22÷0.004mg ＝91500
→結(jié)果為稀釋倍數(shù)大約為90000
→1 ：90000稀釋
1 ：90000
1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）
1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）
1 ：9（0.1 ml ＋ 0.8 ml）
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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