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點(diǎn)擊次數(shù)：18058 發(fā)布時(shí)間：2019/7/17 16:08:53
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，*常使用的Bovogen胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的Bovogen澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Bovogen FBS或者20%的Bovogen胎牛血清，要根據(jù)具體 細(xì)胞選擇合適的胎牛血清濃度。
1、需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾血清。
3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑 點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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