ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制

點擊次數(shù)：18670 發(fā)布時間：2018/8/7 22:37:07

一、elisa實驗中的封閉液小知識

ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：

1、ELISA實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;

2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護劑”的作用。

4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實驗表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結合上的明膠。封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結合了，不會影響實驗的準確度。

二、tween的作用：雖然不能單獨封閉，但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結合或結合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-<yy的情況，在用tween后會出現(xiàn)yy p="">

三、附件：ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?*近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：(1)　ELISA實驗包被緩沖液(2)　ELISA實驗洗滌緩沖液(2)　ELISA實驗洗滌緩沖液(3)　ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7)　ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。

試劑

(1)　ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

NaHCO3需1.59克，NaHCO3需2.93克，加蒸餾水至1000ml

(2)　ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

KH2PO4需0.2克，Na2HPO4·12H2O需2.9克，NaCl需8.0克，KCl需0.2克，Tween-20需0.05%需0.5ml，加蒸餾水至1000ml

(3)　ELISA實驗稀釋液：牛血清白蛋白(BSA) 0.1克，加洗滌緩沖液至100ml，或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

(4)　ELISA實驗終止液(2M　H2SO4)：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

(5)　ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml，0.1M 檸檬酸(19.2克/L)需24.3ml，加蒸餾水50ml。

(6)　ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml，底物緩沖液(PH5.5)需10ml，0.75%H2O2 32μl

(7)　ELISA實驗ABTS使用液:ABTS需0.5mg，底物緩沖液(PH5.5)需1ml，3%H2O2 2μl

(8)ELISA實驗封閉液：牛血清白蛋白(BSA) 5克，加洗滌緩沖液至100ml。

注：值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。

關鍵詞：ELISA封閉液封閉劑緩沖液蔗糖抗體

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