二抗的選擇方法

點(diǎn)擊次數(shù)：17962 發(fā)布時(shí)間：2016/7/19 10:48:22

一、關(guān)于二抗的介紹：

二抗：廣義上是指專門用來和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學(xué)反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對試驗(yàn)選擇不同的二抗。

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可以選擇，同時(shí)在后續(xù)試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測方案，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型和后續(xù)檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾方面考慮：

1、一抗的種屬來源

二抗應(yīng)選用與使用的一抗的物種來源，如一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選用抗小鼠的二抗；如一抗是兔血清制備的多抗，則選用抗兔的二抗。

2、一抗的類別亞型

二抗需要與一抗的類別或亞型匹配，通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體，如果一抗是小鼠IgM，那么二抗相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。

3、二抗的種屬來源

一般來說，不同種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別，然而在雙標(biāo)試驗(yàn)中，如果其中一個(gè)一抗是山羊來源的，一個(gè)是小鼠來源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或小鼠來源的。

4、二抗的偶聯(lián)標(biāo)記

一般來講，偶聯(lián)到二抗的探針主要有酶，熒光基團(tuán)，生物素，金顆粒。選用哪種探針的二抗取決于具體的實(shí)驗(yàn)，對于Western blot和ELISA，*常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。

5、是否血清吸附過

如果您的檢測樣本室人源的蛋白，一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗就要選擇抗小鼠源的二抗，如果對實(shí)驗(yàn)特異性要求很高，那么推薦用人血清吸附過的抗小鼠的二抗，這種二抗由于經(jīng)過人血清吸附而排除了與人源組織可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的IgG，因此非特異性結(jié)合降低到。

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