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技術(shù)文章

細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

點(diǎn)擊次數(shù):16929   發(fā)布時(shí)間:2022/12/26 12:06:54

 操作一、25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E從-20℃的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取 xx 毫升稀釋液(Reagent D 2 毫升離心管,加入 xx 微升染色液(Reagent E,混勻后,放進(jìn) 37℃恒溫2 水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作:

1 小心抽去 25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液

2 小心加入 xx 毫升清理液(Reagent A,清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面

3 小心抽去清理液

4 小心加入 xx 毫升固定液(Reagent B,覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面

5 在室溫下孵育 5 分鐘

6 小心抽去固定液

7 小心加入 xx 毫升酸性液(Reagent C,清洗細(xì)胞表面

8 小心抽去酸性液

9 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 7 8 一次

10.小心加入 xx 毫升染色工作液,覆蓋整個(gè)細(xì)胞表面

11.放進(jìn) 37℃培養(yǎng)箱,孵育 3 小時(shí)至 16 小時(shí),或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)

12.在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色。

 

操作二、24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E從-20℃的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取 xx 毫升稀釋液(Reagent D 15 毫升錐形離心管,加入 xx 微升染色液(Reagent E,混勻后,放進(jìn) 37℃ 恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。

1.小心抽去 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2.每孔加入 xx 微升清理液(Reagent A,清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面

3.小心抽去每孔里的清理液

4.每孔加入 xx 微升固定液(Reagent B,覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面

5.在室溫下孵育 5 分鐘

6.小心抽去固定液

7.每孔加入 xx 微升酸性液(Reagent C,清洗細(xì)胞表面

8.小心抽去酸性液

9.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 7 8 一次

10.每孔加入 xx 微升染色工作液,覆蓋整個(gè)細(xì)胞表面

11.放進(jìn) 37℃培養(yǎng)箱,孵育 3 小時(shí)至 16 小時(shí),或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)

12.在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色

 

注意事項(xiàng)

1 本產(chǎn)品為 100 次(4 個(gè) 24 孔板)或 20 次(20 個(gè) 25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶)操作

2 操作時(shí),須戴手套

3 本產(chǎn)品的參數(shù):固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達(dá)到zui優(yōu)

4 使用時(shí),避免污染母液,否則出現(xiàn)絮狀沉淀,影響實(shí)驗(yàn)效果

5 染色工作液避免光照

6 細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性強(qiáng),孵育 3 小時(shí)即顯示陽(yáng)性;細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性弱,則需要孵育 24 小時(shí)

7 細(xì)胞染色*長(zhǎng)孵育時(shí)間為 24 小時(shí)

8 孵育時(shí)避免液體蒸發(fā)3

9 本產(chǎn)品染色敏感,甚至對(duì)于微弱表達(dá)的酶活性仍然顯色清晰;用戶可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整孵育時(shí)間和染色工作液濃度,使染色恰到好處

10.細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色的部位為衰老細(xì)胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方

11.染色后的細(xì)胞樣品可以在 4℃冰箱里chang保存,同樣須避免光照

12.本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm 培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應(yīng)調(diào)整處理液:

 

操作容器              建議處理液規(guī)格

載玻片                100 微升

載玻片培養(yǎng)皿              1 毫升

35mm 培養(yǎng)皿              1 毫升

96 孔培養(yǎng)板              100 微升

48 孔培養(yǎng)板               200 微升

24 孔培養(yǎng)板              500 微升

12 孔培養(yǎng)板               1 毫升

6 孔培養(yǎng)板               2 毫升

25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶           3 毫升

 

13.本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色敏感

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購(gòu)信息

編號(hào)                      名稱                             規(guī)格

G&VS10012.1         細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒   100/250

G&VS10012.1A        清理液(Reagent A                500 毫升

G&VS10012.1B         固定液(Reagent B               500 毫升

G&VS10012.1C         酸性液(Reagent C                500 毫升

G&VS10012.1D         稀釋液(Reagent D                100 毫升

G&VS10012.1E           染色液(Reagent E              50 毫升

 

產(chǎn)品編號(hào)                   名稱                                        規(guī)格

G&VS10021       細(xì)胞周期流式細(xì)胞分析試劑盒               100

G&VS10033      BrdU 標(biāo)記法細(xì)胞繁殖流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒           10

G&VS10034.1     BrdU 標(biāo)記法載玻片細(xì)胞繁殖熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒       10

G&VS10034.2     BrdU 標(biāo)記法組織冰凍切片細(xì)胞繁殖熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒      10

G&VS10034.3     BrdU 標(biāo)記法組織石蠟切片細(xì)胞繁殖熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒      10

G&VS10034.4      BrdU 標(biāo)記法載玻片細(xì)胞繁殖 NBT 顯色檢測(cè)試劑盒          10

G&VS10034.5     BrdU 標(biāo)記法組織冰凍切片細(xì)胞繁殖 NBT 顯色檢測(cè)試劑盒       10

G&VS10034.6     BrdU 標(biāo)記法組織石蠟切片細(xì)胞繁殖 NBT 顯色檢測(cè)試劑盒       10

G&VS10012.1      細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒          100/250

G&VS10012.2      全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒         10

G&VS10012.3      冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒        50

G&VS10012.4   通用型組織細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒     10/100

G&VS80056.1      細(xì)胞衰老特異性脂褐素原位染色試劑盒               50

G&VS80056.2      全組織衰老特異性脂褐素原位染色試劑盒        10

G&VS80056.3      冰凍切片組織衰老特異性脂褐素原位染色試劑盒        50

G&VS80056.4      石蠟切片組織衰老特異性脂褐素原位染色試劑盒        50

G&VS30072       P16 蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒               5

G&VS30073       P21 蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒               5

G&VS20104       P16 基因表達(dá)北方雜交分析試劑盒               5

G&VS20105       P21 基因表達(dá)北方雜交分析試劑盒               5

G&VS20106.1      端粒酶活性 TRAP 電泳分析試劑盒               20

G&VS20106.2      端粒酶活性 TRAP 實(shí)時(shí)定量檢測(cè)試劑盒           20

G&VS20107       hTERT 表達(dá)實(shí)時(shí)定量檢測(cè)試劑盒       20

G&VS10037.1      細(xì)胞β-半乳糖苷酶化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒        20

G&VS10037.2      細(xì)胞β-半乳糖苷酶比色法定量檢測(cè)試劑盒               20

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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